Caracterização genotípica e fenotípica de amostras de Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) e com padrão chain-Like Adhesion (CLA) isoladas de crianças com e sem diarréia

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dc.contributor.advisor-co1Scaletsky, Isabel Cristina Affonso
dc.contributor.advisor1Spano, Liliana Cruz
dc.contributor.authorMonfardini, Mariane Vedovatti
dc.contributor.referee1Palaci, Moisés
dc.contributor.referee2Elias Junior, Waldir Pereira
dc.date.accessioned2016-12-23T13:56:12Z
dc.date.available2012-08-31
dc.date.available2016-12-23T13:56:12Z
dc.date.issued2012-04-27
dc.description.abstractabstracteng
dc.description.resumoEscherichia coli enteroagregativa (EAEC) é considerada um patógeno emergente de diarreia aguda e persistente em crianças, conhecida pela heterogeneidade de isolados. O objetivo deste estudo foi caracterizar, através de métodos genotípicos e fenotípicos, amostras de E. coli com padrão de aderência agregativo (AA), positivas ou negativas para plasmídio pAA, e de E. coli chain-like adhesion (CLA) de crianças com até doze anos de idade, com e sem diarreia, provenientes de comunidades quilombolas e de bairros de periferia do Norte do Espírito Santo, Brasil. Foram analisadas um total de 202 amostras (57 e 145 de crianças com e sem diarreia, respectivamente), sendo 189 EAEC (81 pAA+ e 108 pAA-) e 13 E. coli com padrão CLA, por: (i) PCR monoplex e multiplex para detecção de 20 genes de virulência, plasmidiais e/ou cromossômicos (aggA, aafA, agg-3A, aggR, aap, shf, agn43, astA, , pet, sen, set1A, sat, hlyA, irp2, iucA, chuA, papC, sfa, fis, e yafK) e categorizados qualitativamente conforme a frequência encontrada; (ii) Teste de formação de biofilme em superfície abiótica, em meio mínimo de Eagle modificado por Dulbecco com 0,4% de glicose, corado com safranina e cristal violeta seguido por leitura de densidade ótica para classificação em formador (forte e fraco) e não formador; (iii) Ensaio de formação de película em caldo Mueller Hinton sob agitação a 37ºC por 20 horas, e classificados em score (0, 1+, 2+, 3+). Os seguintes genes foram detectados nos isolados de EAEC: (i) fis e yafK em altíssima frequência (>80% das amostras); (ii) irp2, pet, agn43 e iucA em alta frequência (30-50% das amostras); (iii) astA e shf em moderada frequência (20-30%); (iv) aap, aggR, sat, set1A e chuA em baixa frequência (10-20%) e; (v) aafA, aggA, agg-3A, hlyA, papC e sen em baixíssima frequência (<10%). O gene sfa não foi encontrado. O gene agn43 foi estatisticamente significante entre as amostras de EAEC de crianças com diarreia (p<0,05). EAEC típica e atípica corresponderam a 16,4% e 83,6% do isolados, respectivamente, e não foram associadas à diarreia (p>0,05). Os genes aap e agn43 foram isoladamente associados aos isolados de EAEC atípica de crianças com diarreia (p<0,05). O gene chuA foi associado aos isolados de EAEC pAA- de crianças com diarreia (p<0,05). Foram produtoras de biofilme 30,7% (safranina) e 24,9% (cristal violeta) das amostras de EAEC e nenhuma das amostras com padrão CLA. Os genes aap, agg-3A, aggR e shf foram significantes entre os isolados biofilme+ (p<0,05). A formação de película foi encontrada em 72% das amostras de EAEC e em 100% das E. coli com padrão CLA. Nas amostras com padrão CLA foram detectados nove dos 20 genes pesquisados [fis (100%), pet (92,3%), iucA (76,9%), yafK (76,9%) agn43 (69,2%), chuA (7,7%), hlyA (15,4%), irp2 (23,1%) e shf (7,7%)]. Estes resultados demonstram (i) a baixa frequência de EAEC típica na população estudada, (ii) genes que codificam as adesinas AAF em baixíssima frequência, (iii) a formação de biofilme incomum nas amostras de EAEC e não associada à diarreia, (iv) altíssima frequência do gene pet nas amostras de E. coli com padrão CLA (v) E. coli com padrão CLA com características genotípicas e fenotípicas distintas da EAEC. Estes resultados confirmam a heterogeneidade genética das amostras de EAEC e sugerem subpopulações mais virulentas (EAEC agn43+, EAEC atípica aap+ e/ou agn43+ e, EAEC pAA- chuA+).
dc.formatText
dc.identifier.citationMONFARDINI, Mariane Vedovatti. Caracterização genotípica e fenotípica de amostras de Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) e com padrão chain-Like Adhesion (CLA) isoladas de crianças com e sem diarréia. 2012. 96 f. Dissertação (Mestrado em Doenças Infecciosas) - Programa de Pós-Graduação em Doenças Infecciosas, Universidade Federal do Espírito Santo, Vitória, 2012.
dc.identifier.urihttps://dspace5.ufes.br/handle/10/5955
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal do Espírito Santo
dc.publisher.countryBR
dc.publisher.courseMestrado em Doenças Infecciosas
dc.publisher.departmentCentro de Ciências da Saúde
dc.publisher.initialsUFES
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Doenças Infecciosas
dc.rightsopen access
dc.subjectEnteroaggregative Escherichia coli (EAEC)eng
dc.subjectE. coli with chain-like adhesion pattern (CLA)eng
dc.subjectVirulence geneseng
dc.subjectBiofilm formationeng
dc.subjectClump formationeng
dc.subjectEscherichia coli enteroagregativa (EAEC)por
dc.subjectEscherichia coli com padrão chainlike adhesion (CLA)por
dc.subjectGenes de virulênciapor
dc.subjectFormação de biofilmepor
dc.subjectFormação de películapor
dc.subject.cnpqDoenças Infecciosas e Parasitárias
dc.subject.udc61
dc.titleCaracterização genotípica e fenotípica de amostras de Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) e com padrão chain-Like Adhesion (CLA) isoladas de crianças com e sem diarréia
dc.typemasterThesis

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