L-NAME aumenta a expressão de proteínas de estresse (Hsp72) induzida pelo exercício físico e altera a dinâmica de contração-relaxamento de cardiomiócitos isolados do ventrículo esquerdo de ratos

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dc.contributor.advisor1Mill,José Geraldo
dc.contributor.authorLunz, Wellington
dc.contributor.referee1Natali, Antônio José
dc.contributor.referee2Vassallo, Dalton Valentim
dc.contributor.referee3Stefanon, Ivanita
dc.contributor.referee4Nascimento, Jose Hamilton Matheus
dc.date.accessioned2018-08-01T22:59:14Z
dc.date.available2018-08-01
dc.date.available2018-08-01T22:59:14Z
dc.date.issued2010-12-16
dc.description.abstractL-NAME Enhances the Exercise-induced Stress Protein (Hsp72) and Affects the Contractile Function of Left Ventricle Single Myocytes from Rats.eng
dc.description.resumoL-NAME Aumenta a Expressão de Proteínas de Estresse (Hsp72) Induzida pelo Exercício Físico e Altera a Dinâmica de Contração-Relaxamento de Cardiomiócitos Isolados do Ventrículo Esquerdo de Ratos. Introdução. O exercício físico aumenta tanto a expressão da chaperona Hsp72 quanto a biodisponibilidade de óxido nítrico (NO) no miocárdio. Estudos sugerem que o NO modula a expressão de Hsp72, entretanto ainda não há conhecimento se o NO participa da hiperexpressão cardíaca de Hsp72 induzida pelo exercício. A administração de L-NAME, um inibidor não seletivo das enzimas sintase de NO (NOS), pode causar fibrose e necrose do miocárdio prejudicando a função cardíaca. Entretanto, não há conhecimento se o L-NAME altera a função contrátil de miócitos isolados do ventrículo esquerdo (VE). Objetivos. Os principais objetivos do presente estudo foram: (1) investigar se o L-NAME impediria o aumento de Hsp72 induzido por exercício no VE de ratos; (2) investigar se o L-NAME afetaria a função contrátil de miócitos isolados do VE de ratos. Materiais e Métodos. Ratos Wistar (70-100 dias) foram aleatoriamente distribuídos entre os dois protocolos experimentais desse estudo. No Protocolo 1, os ratos foram divididos em quatro grupos: Controle (C1; n = 12), L-NAME (L1; n = 12), exercício (E1; n = 13) ou exercício+L-NAME (EL1; n = 20). O L-NAME foi administrado na água de beber (700 mg/L) por sete dias. Os animais dos grupos E1 e EL1 foram submetidos a exercício físico em esteira (15-25 m/min, 40-60 min/sessão) também por sete dias. O Protocolo 1 foi usado para investigar o primeiro objetivo do estudo. No Protocolo 2, os ratos foram alocados em dois grupos: Controle (C2; n = 8) ou L-NAME (L2; n = 8). A administração de L-NAME foi igual à descrita para o Protocolo 1. O Protocolo 2 foi usado para investigar o segundo objetivo do estudo. A técnica de Western blotting foi utilizada para investigar as expressões protéicas de Hsp72, NOS endotelial (eNOS), neuronal (nNOS) e induzível (iNOS), isoformas fosforiladas da NOS (p-eNOS e p-nNOS), isoforma cardíaca da ATPase de Ca2+ do retículo sarcoplasmático (SERCA2a), isoforma cardíaca do receptor de rianodina 2 (RyR2) e o trocador de sódio/cálcio (NCX) do VE. A atividade das NOSs do VE também foi medida in vitro pela conversão de [3H]L-arginina para [3H]L-citrulina. Miócitos isolados do VE foram obtidos dos animais do Protocolo 2. A função contrátil desses miócitos foi medida na 15 condição basal para se avaliar os efeitos da administração de L-NAME in vivo por curto prazo. Em seguida, a função contrátil também foi medida após exposição in vitro dos miócitos ao L-NAME (0,2 mM) para se avaliar o efeito da inibição aguda das NOSs. Resultados. Como era esperado o exercício (grupo E1) aumentou a expressão de Hsp72 (223%; p < 0,05) comparado ao grupo C1. Entretanto, o exercício não alterou a expressão das isoformas NOS e p-NOS e não alterou a atividade das NOSs. Por outro lado, diferentemente da expectativa inicial, o L-NAME amplificou (p < 0,05) a expressão de Hsp72 induzida pelo exercício no VE dos animais estudados (grupo EL1 vs. grupos C1, L1 e E1 = 1019%, 548% e 457%, respectivamente). A interação exercício+L-NAME (grupo EL1) também aumentou (p < 0,05) a expressão de p-eNOSSer1177 (acima de 200%), que é uma isoforma estimulatória da eNOS, e diminuiu a expressão de p-nNOSSer852 (em torno de 50%), que é uma isoforma inibitória da nNOS, em comparação aos grupos E1 e L1. Apesar disso, a atividade das enzimas NOS não foi diferente entre os grupos estudados. Na condição basal, cardiomiócitos do grupo L2 apresentaram maior (p < 0,05) percentual de encurtamento (23%) e velocidade máxima de contração (VMC, 20%) comparados aos cardiomiócitos do grupo C2. A expressão protéica de RyR2 e NCX foi aumentada no VE dos animais do grupo tratado com L-NAME in vivo (RyR2 = 76% e NCX = 83% em relação ao grupo não tratado com L-NAME; p < 0,05) sugerindo remodelamento funcional desses miócitos. A exposição ao L-NAME in vitro (0,2 mM) aumentou a VMC e a VM de relaxamento (MVR) dos miócitos tanto do grupo C2 quanto do grupo L2 (grupos C2 e L2; MVC = 32% e 20%; MVR = 55% e 31%, respectivamente). Conclusão. Os resultados permitem sugerir que a expressão de Hsp72 induzida pelo exercício físico independe do NO. Por outro lado, a administração de L-NAME amplifica o aumento de Hsp72 induzido pelo exercício, aparentemente por mecanismos que independem diretamente do NO. A administração de L-NAME in vivo por curto prazo aumenta a função contrátil de cardiomiócitos aparentemente via aumento compensatório de proteínas reguladoras do Ca2+ intracelular. A função contrátil aumentada de miócitos isolados do VE após inibição das enzimas NOS in vitro sustenta que o NO regula o acoplamento excitação-contração celular.
dc.formatText
dc.identifier.citationLUNZ, Wellington. L-NAME aumenta a expressão de proteínas de estresse (Hsp72) induzida pelo exercício físico e altera a dinâmica de contração-relaxamento de cardiomiócitos isolados do ventrículo esquerdo de ratos. 2010. Tese (Doutorado em Ciências Fisiológicas) - Universidade Federal do Espírito Santo, Centro de Ciências da Saúde, Vitória, 2010.
dc.identifier.urihttps://dspace5.ufes.br/handle/10/8035
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal do Espírito Santo
dc.publisher.countryBR
dc.publisher.courseDoutorado em Ciências Fisiológicas
dc.publisher.departmentCentro de Ciências da Saúde
dc.publisher.initialsUFES
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas
dc.rightsopen access
dc.subjectheat shock proteineng
dc.subjectnitric oxideeng
dc.subjectisolated cardiomyocyteeng
dc.subjectcellular contractioneng
dc.subjectmyocyte contractile functioneng
dc.subjectproteína de estressepor
dc.subjectóxido nítricopor
dc.subjectcardiomiocitos isoladospor
dc.subjectcontração celularpor
dc.subjectfunção contrátil de miócitospor
dc.subject.cnpqFisiologia
dc.subject.udc612
dc.titleL-NAME aumenta a expressão de proteínas de estresse (Hsp72) induzida pelo exercício físico e altera a dinâmica de contração-relaxamento de cardiomiócitos isolados do ventrículo esquerdo de ratos
dc.title.alternativeL-NAME Enhances the Exercise-induced Stress Protein (Hsp72) and Affects the Contractile Function of Left Ventricle Single Myocytes from Rats.
dc.typedoctoralThesis

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